Антитела к неактивным конформациям глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы инактивируют апо- и холоформу фермента

Аннотация

Из смеси поликлональных антител, выработанных в ответ на иммунизацию кроликов глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназой (ГАФД) бактерии Bacillus stearothermophilus, выделены два типа антител, специфически связывающихся с разными ненативными формами антигена. Антитела типа 1 были очищены с помощью иммуносорбента, в качестве которого служила связанная с сефарозой апо-ГАФД, стабилизированная в тетрамерной форме сшивкой глутаровым альдегидом. Антитела типа 2 изолировали, используя иммобилизованные денатурированные мономеры фермента. Показано, что антитела типа 1 связываются с нативными холо- и апоферментами ГАФД в соотношении одна молекула антитела на тетрамер ГАФД. При взаимодействии с нативным холоферментом антитела типа 1 индуцируют снижение его активности на 80–90%, развивающееся во времени. В случае апофермента активность снижается только на 25%, то есть инактивируется только одна из 4 субъединиц тетрамера. Методом дифференциальной сканирующей калориметрии показано, что в бинарных комплексах обоих форм фермента с антителами типа 1 температура максимума теплопоглощения (T_m) сдвигается в сторону более низких температур. При этом в составе комплекса в наибольшей степени сдвигается T_m исходно чрезвычайно термостабильного холофермента (сдвиг приблизительно на 20°). Эти результаты интерпретируются в рамках гипотезы, согласно которой образование комплекса апо- или холо-ГАФД. с антителом типа 1 приводит к развивающимся во времени изменениям их конформации. При этом антитела индуцируют такие структурные перестройки, которые позволяют сформировать конформацию, идентичную структуре антигена, использованного для отбора антитела (т.е. неактивного). При этом при взаимодействии антител с апоформой ГАФД инактивируется только одна субъединица, связанная непосредственно с антителом. Практически полная инактивация антителами холофермента, вероятно, обусловлена передачей конформационных изменений через межсубъединичные контакты. Антитела типа 2, «отобранные» на иммуносорбенте по сродству к развернутой конформации фермента, практически не влияют на активность нативных апо- и холо-ГАФД, но препятствуют реактивации денатурированного белка, связывая его развернутую форму.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: