Влияние полиолов и солей на индуцируемое кислотой состояние цистатина плаценты человека

Аннотация

Полиолы (глицерол и сорбитол) и соли (сульфат магния, сульфат натрия и хлорид магния) были использованы для изучения рефолдинга индуцированного кислотой состояния цистатина плаценты человека (ЧПЦ) – низкомолекулярного (12 500 Да) ингибитора тиоловой протеиназы. Состояние белка определяли методом кругового дихроизма, по степени связывания гидрофобного красителя 1-анилинонафтален-8-сульфоновой кислоты, а также с помощью измерения собственной флуоресценции. Содержание спиралей в денатурированном кислотой белке возрастало с увеличением концентрации глицерола (0–80%). Было показано, что в 80%-ном глицероле и в нативном состоянии (рН 6,0) признаки вторичной структуры, наблюдаемые в дальнем УФ-диапазоне КД, похожи. Измерения собственной флуоресценции и КД в ближнем УФ-диапазоне показали, что это индуцируемое 80%-ным глицеролом состояние по сравнению с состоянием, к которому приводит денатурация кислотой, обладает значительной долей третичной структуры, но в меньшей степени связывает АНС. Было найдено, что глицерол более эффективно по сравнению с сорбитолом стабилизирует ЧПЦ в состоянии, возникающем в результате денатурации кислотой. Среди солей стабилизационный эффект был наиболее выражен для MgCl₂ по сравнению с MgSO₄ и Na₂SO₄. По сходству вторичной и третичной структур MgCl₂– и глицеролиндуцированное состояние близко к нативному, а по общим спектральным свойствам оно находится между нативным состоянием и состоянием после денатурации кислотой. Это состояние характеризовалось снижением флуоресценции АНС по сравнению с состоянием после денатурации кислотой, однако, флуоресценция была выше, чем в нативном состоянии.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: