Взаимодействие диметил- и монометилоксилюциферина с рекомбинантной и мутантной люциферазами светляков

Аннотация

Методом флуоресцентного титрования при рН 6,5–9,0 определены константы диссоциации (K_s) комплексов люциферина (LH₂), диметилоксилюциферина (DMOL) и монометилоксилюциферина (MMOL) с рекомбинантной и мутантной (His433Tyr) люциферазами светляков Luciola mingrelica. Установлено, что K_s для DMOL и MMOL выше, чем для LH₂. Отмечено, что протонированные формы эффекторов лучше связываются рекомбинантной и мутантной люциферазами по сравнению с непротонированными. Обнаружено, что DMOL имеет большее сродство к мутантной люциферазе, чем к рекомбинантной при щелочных рН, а MMOL – во всем изученном интервале значений рН. Получены спектры флуоресценции и возбуждения DMOL и MMOL при рН 7,8 в буферном растворе в отсутствие и в присутствии люциферазы. Определено, что максимум флуоресценции DMOL и MMOL в комплексе c люциферазой смещался в коротковолновую область спектра по сравнению с буферным раствором на 20 и 100 нм соответственно. Это объяснено неспецифическим влиянием белкового микроокружения на спектры флуоресценции DMOL и специфическим – на спектры флуоресценции MMOL.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: