Модифицированные ДНК-дуплексы селективно и необратимо связываются с фактором транскрипции NF-κB в лизатах опухолевых клеток человека

Аннотация

Изучено ковалентное связывание синтетического фрагмента ДНК с эукариотическим фактором транскрипции NF-κB в лизатах клеток карциномы кишки человека HCT-116. Для связывания использовали ³²P-меченный 17/19-звенный ДНК-дуплекс, содержавший участок узнавания NF-κB (κB-участок), в котором одна из межнуклеотидных фосфатных групп заменена на химически активную тризамещенную пирофосфатную группировку (ТЗПГ). Методом гель-электрофореза в денатурирующих условиях (по Лэммли) с последующим иммуноблоттингом установлено, что ³²P-меченный ДНК-дуплекс селективно и необратимо связывается с NF-κB в лизатах опухолевых клеток в присутствии остальных компонентов клетки. Проведенные испытания по доставке этого ДНК-дуплекса, содержавшего на 3′-конце модифицированной цепи остаток родамина, в опухолевые клетки НСТ-116 показали, что родаминмеченная ДНК проникает через клеточную мембрану без дополнительных систем доставки. С применением метода флуоресцентной микроскопии установлено, что родаминмеченная ДНК первоначально локализуется в цитоплазме. Методом конфокальной лазерной сканирующей микроскопии обнаружено, что при последующей обработке клеток TNF-α ДНК-реагент частично транслоцируется в ядро.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: