Белки cемейства RPF (Resuscitation promoting factor) являются пептидогликангидролазами

Аннотация

Белок Rpf, секретируемый в культуральную жидкость бактерией Micrococcus luteus, является фактором, необходимым для реактивации покоящихся клеток M. luteus и стимуляции роста бактериальной культуры на бедных средах. Биохимический механизм действия этого белка оставался неизвестным. Теоретическое предсказание третичной структуры и недавно опубликованные данные анализа структуры Rpf методом ЯМР указывают на наличие в консервативной части молекулы Rpf так называемого «лизоцимового фолда». В настоящей работе установлено, что образцы нативного и рекомбинантного белка Rpf лизируют препарат клеточных стенок M. luteus. Нативный и рекомбинантный Rpf также гидролизуют синтетический субстрат пептидогликангидролаз (мурамидаз) – 4-метилумбелиферил-β-D-N,N’,N”-триацетилхитотриозид при pH оптимуме реакции, равном 6. Белок Rpf проявляет слабую пептидазную активность по отношению к субстрату N-CBZ-Gly-Gly-Arg-β-нафтиламиду. Замена консервативного для всех белков семейства Rpf Glu54 (предположительно необходимого для катализа) приводила к снижению активности по 4-метилумбелиферил-β-D-N,N’,N”-триацетилхитотриозиду и способности Rpf реактивировать «некультивируемые» клетки Mycobacterium smegmatis. Полученные данные свидетельствуют, что белки семейства Rpf являются ферментами пептидогликангидролазами, и именно с этой активностью, очевидно, связан биологический эффект данных белков. В работе обсуждается возможный механизм оживления покоящихся клеток M. luteus под воздействием Rpf.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: