Изучение низкомолекулярных фитоцистатинов индийской фасоли (Phaseolus mungo)^*

Аннотация

В результате двух стадий очистки (фракционирование сульфатом аммония и гель-фильтрация на сефакриле S-100 HR) получены гомогенные препараты фитоцистатинов (ингибиторов тиоловых протеаз) из индийской фасоли (Phaseolus mungo). Два белковых пика, полученных в результате гель-фильтрации, были обозначены PMCI и PMCII. Для обоих фитоцистатинов pH-оптимум находился в области 7,0. Температурный оптимум для PMCI и PMCII был равен соответственно 65 и 70°. Молекулярная масса фитоцистатинов PMCI и PMCII согласно данным Ds-Na-электрофореза и масс-спектрометрии равна соответственно 19 и 17 кДа. При исследовании методом двойной иммунодиффузии по Ухтерлони с использованием антител против очищенных цистатинов выявлена одна полоса преципитации. Цистатины PMCI и PMCII существенно ингибировали папаин и фицин, но не оказывали влияния на трипсин и химотрипсин. Методами флуоресцентной и КД-спектроскопии исследовано влияние мочевины на PMCI и PMCII. Данные КД-спектроскопии свидетельствуют о разворачивании молекул PMCI и PMCII, что сопровождается снижением содержания гидратированных растянутых спиральных структур и возрастанием структур складчатого типа. Результаты инфракрасной спектроскопии с преобразованием Фурье показали, что структура PMCI близка к структуре PMCII. В присутствии мочевины гидрофобные взаимодействия сохранялись в течение 5–150 мин. Результаты флуоресцентной спектроскопии подтвердили результаты КД-спектроскопии, поскольку тушение флуоресценции PMCI и PMCII связано с изменением окружения ароматических кислот в белках. Оба цистатина оказывают сильное ингибирующее влияние на Escherichia coli и Staphylococcus aureus.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: