L-метионин-γ-лиаза Citrobacter freundii: клонирование гена и кинетические параметры фермента^*

Аннотация

Впервые показано наличие гена, кодирующего L-метионин-γ-лиазу, в геноме бактерий Citrobacter freundii семейства Enterobacteriaceae. Гомогенный фермент получен из клеток C. freundii и определена последовательность четырнадцати N-концевых аминокислот. Проведено клонирование фрагментов хромосомы C. freundii в векторе pUC18. Сконструирована гибридная плазмида pUCmgl, содержащая в EcoRI-вставке размером 3000 п.н. ген, экспрессирующий в клетках Escherichia coli TG1 активную L-метионин-γ-лиазу. Определена нуклеотидная последовательность этого фрагмента, содержащего две открытые рамки считывания. Первая кодирует L-метионин-γ-лиазу, а вторая кодирует белок, который имеет гомологию с белками транспорта и относится к семейству пермеаз. Для суперпродукции L-метионин-γ-лиазы C. freundii сконструирована гибридная плазмида pET-mgl. Рекомбинантный фермент очищен и определены его кинетические параметры. В клетках E. coli K-12, содержащих гибридную плазмиду с геном L-метионин-γ-лиазы (названным megL), наблюдается ослабление EcoKI-рестрикции, что указывает на снижение внутриклеточного пула S-аденозилметионина. В клетках C. freundii экспрессия гена megL индуцируется лишь при наличии в среде значительного количества L-метионина.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: