Смена кинетического режима агрегации белков при повышении температуры. Тепловая агрегация креатинкиназы из скелетных мышц кролика

Аннотация

Кинетика агрегации креатинкиназы изучена в 30 мМ буфере Hepes-NaOH, pH 8,0, при 50,6 и 60°. За кинетикой агрегации следили по увеличению кажущегося поглощения (A) при 400 нм. Установлено, что предельное значение кажущегося поглощения (A_lim) прямо пропорционально концентрации белка при обеих температурах. Константа скорости реакции первого порядка не зависит от концентрации белка в диапазоне 0,05–0,2 мг/мл при 50,6° и растет при увеличении концентрации белка в интервале 0,1–0,4 мг/мл при 60°. Кинетические кривые, представленные в координатах {A/A_lim; t}, в опытах при 50,6° сливаются в одну общую кривую. Эта кривая совпадает с теоретической кривой денатурации креатинкиназы, построенной с использованием константы скорости денатурации, определенной из данных по дифференциальной сканирующей калориметрии. При 60° время полупревращения для кинетических кривых агрегации уменьшается при увеличении концентрации белка. Сделан вывод, что увеличение температуры от 50,6 до 60° приводит к смене кинетического режима тепловой агрегации креатинкиназы: при 50,6° скорость агрегации лимитируется стадией денатурации белковой молекулы, а при 60° – стадией роста агрегата белка, которая протекает как реакция псевдопервого порядка. Малый белок теплового шока Hsp 16.3 Mycobacterium tuberculosis подавляет агрегацию креатинкиназы.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: