БИОХИМИЯ, 2006, том 71, вып. 3, с. 312–319
УДК 577.152.1
Очистка и характеристика алкогольоксидазы из генетически сконструированного штамма-сверхпродуцента метилотрофных дрожжей Hansenula polymorpha*
1 Институт биохимии им. А.Н. Баха РАН
2 Институт биологии клетки НАНУ
3 Институт биотехнологии Жешувского университета
Поступила в редакцию 24.03.2005
После доработки 12.09.2005
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: алкогольоксидаза, штамм-сверхпродуцент, спектральные и кинетические свойства, вторичная структура.
Аннотация
Алкогольоксидаза (AO) была восьмикратно очищена из штамма-сверхпродуцента Hansenula polymorpha C-105 (gcr1 catX), полученного генетическим конструированием из метилотрофных дрожжей. Этот штамм обладает ослабленной глюкозной катаболитной репрессией и полностью лишен каталазы. С помощью электрофореза в полиакриламидном геле и ЖХВД установлено, что конечный препарат фермента был гомогенным. Изучены некоторые физико-химические и биохимические характеристики AO: молекулярная масса (~620 кДа), изоэлектрическая точка (6,1), спектральные свойства (спектры поглощения, кругового дихроизма и флуоресценции). Содержание различных мотивов вторичной структуры фермента было вычислено по данным КД-спектров с использованием компьютерной программы «КД-белок». Показано, что нативный фермент содержит ~50% α-спиралей, 25% β-слоев наряду с 20% беспорядочных структур. Кинетические измерения при определении каталитических параметров ферментативных реакций различных субстратов, таких как метанол, этанол и формальдегид, проводили на кислородном электроде типа Кларка. Установлено, что скорость ферментативного окисления формальдегида алкогольоксидазой из H. polymorpha всего лишь в 2 раза ниже, чем скорость окисления лучшего субстрата АО – метанола.
Текст статьи
Сноски
* Первоначально английский вариант рукописи был опубликован на сайте «Biochemistry» (Moscow) Papers in Press, BM05-087, 25.12.2005.
** Адресат для корреспонденции и запросов оттисков.