Обнаружение и выделение из грудного молока комплекса церулоплазмина и лактоферрина

Аннотация

Впервые доказано существование в грудном молоке (ГМ) комплекса медьпротеида–церулоплазмина (ЦП, ферро-O₂-оксидоредуктаза, КФ 1.16.3.1) и лактоферрина (ЛФ). Электрофоретическая подвижность ЦП в ГМ при ПААГ-электрофорезе в неденатурирующих условиях меньше, чем у ЦП из плазмы крови, и идентична подвижности комплекса, образующегося при смешивании очищенных препаратов ЦП и ЛФ. При аффинной хроматографии делипидированного ГМ на ЦП-сефарозе сорбировался ЛФ. В элюате 0,3 М NaCl с помощью Ds-Na-ПААГ-электрофореза выявлена единственная 78 кДа зона, которая иммунологически и по определению N-концевой аминокислотной последовательности соответствует ЛФ. Синтетические пептиды R-R-R-R (N-концевой пептид ЛФ (2–5)) и K-R-Y-K-Q-R-V-K-N-K (С-концевой пептид PACAP 38 (29–38)) эффективно элюировали ЛФ с ЦП-сефарозы. Хроматографические смолы, применяемые для выделения ЦП (AE-Агароза) и ЛФ (СМ-Сефадекс), не сорбируют комплекс ЦП–ЛФ из снятого ГМ. Анионные пептиды ЦП (586–597), (721–734) и (905–914) эффективно элюировали ЦП с АЕ-Агарозы, но не диссоциировали комплекс ЦП–ЛФ. При добавлении к ГМ, пропущенному через CM-Сефадекс, антител к ЛФ вместе с ЛФ коиммунопреципитировал ЦП. Выделение комплекса ЦП–ЛФ из ГМ включало хроматографию на CM-Сефадексе, спиртовое осаждение и аффинную хроматографию на AE-Агарозе, что позволило добиться чистоты комплекса 98%. Полученный комплекс ЦП–ЛФ (1 : 1) был разделен на компоненты при хроматографии на гепарин-сефарозе. При ограниченном триптическом гидролизе препаратов ЦП из ГМ и плазмы крови выявлены идентичные протеолитические фрагменты.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: