Использование адресующей последовательности дрожжевой дегидрогеназы D-лактата для встраивания CYP11A1 во внутреннюю мембрану дрожжевых митохондрий^*

Аннотация

Установлено, что цитохром P450scc млекопитающих (CYP11A1p) является псевдоинтегральным белком внутренней мембраны митохондрий с активным центром, экспонированным в матрикс. Ранее показано, что при импорте в дрожжевые митохондрии предшественника CYP11A1p лишь незначительная доля белка включалась во внутреннюю мембрану митохондрий и приобретала каталитически активную форму. В настоящей работе сделана попытка увеличить эффективность этого процесса путем замены собственной N-концевой препоследовательности CYP11A1p на адресующий сигнал дегидрогеназы D-лактата (D-LD) дрожжей Saccharomyces cerevisiae. Известно, что D-LD встраивается во внутреннюю мембрану митохондрий с помощью трансмембранного домена, расположенного вблизи N-конца полипептидной цепи, таким образом, что белковая глобула экспонируется в межмембранное пространство. Показано, что синтезирующийся в дрожжевых клетках гибридный белок D-LD(1–72)-mCYP11A1 импортируется в митохондрии дрожжевых клеток, процессируется и встраивается во внутреннюю мембрану со стороны межмембранного пространства. Гибридный белок проявляет холестеринмонооксигеназную/лиазную активность при наличии адренодоксина и адренодоксинредуктазы. Полученные данные свидетельствуют о том, что при встраивании CYP11A1р во внутреннюю мембрану митохондрий, опосредованном топогенным сигналом D-LD, mCYP11A1p-домен в составе гибридного белка способен связывать гем и обладает каталитической активностью.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: