Синтез модельного фосфодиэфирного «узла связи» между РНК и белком ВПг пикорнавирусов, получение и характеристика антител к модельному соединению

Аннотация

Предполагается, что у онкологических пациентов, прошедших терапию ингибиторами ДНК-топоизомераз, должны образовываться ковалентные комплексы ДНК-топоизомераз и клеточных РНК. Обнаружение комплексов возможно с помощью антител на гаптен, содержащий предполагаемую «узловую» структуру, Tyr-pUp. Синтетический гаптен, [N(Ac),CO(NH₂)]Tyr-(5’P → O)Up-O-(CH₂)₆NH₂, конъюгировали с БСА глутаровым диальдегидом, и полученным антигеном иммунизовали кролика. Для очистки антител были синтезированы два аффинных сорбента: гаптен–сефароза и БСА–сефароза. С помощью набора «иммунозолото» на мембранах установлено, что поликлональные аффинно-очищенные антитела специфически узнают гаптен и вирусный ковалентный комплекс РНК–ВПг (вирусный протеин, связанный с геномом) пикорнавируса, в котором остаток тирозина белка образует фосфодиэфир с остатком уридиловой кислоты РНК. Полученные антитела могут быть инструментом при изучении механизма синтеза пикорнавирусных РНК и для поиска, выделения и анализа клеточных ковалентных комплексов ДНК-топоизомераза–РНК. Определение комплексов РНК–ДНК-топоизомеразы может быть полезным для оценки эффективности терапии некоторых онкологических заболеваний и понимания механизма действия ингибиторов ДНК-топоизомераз in vivo.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: