БИОХИМИЯ, 2005, том 70, вып. 9, с. 1218–1225
УДК 577.218
Клонирование и экспрессия небольшого фрагмента кДНК, кодирующего сильный антивирусный пептид Celosia cristata, в Escherichia coli*
1 Department of Biology, University of Tabriz
2 Department of Plant Breeding and Biotechnology, University of Tabriz
3 Division of Biochemistry, Indian Agricultural Research Institute
Поступила в редакцию 02.08.2004
После доработки 08.11.2004
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: Celosia cristata, антивирусный белок, инактивирующий рибосому белок, клонирование, экспрессия.
Аннотация
Небольшой фрагмент кДНК, содержащий сайт инактивации рибосом, был выделен из популяции кДНК листа Celosia cristata с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). Линейную ПЦР проводили с использованием вырожденного праймера, созданного на основе частично консервативного пептида антивирусных белков или белков, инактивирующих рибосому. Анализ последовательности показал, что длина полученного фрагмента составляет 150 пар оснований. Фрагмент кДНК клонировали в бактериальный экспрессирующий вектор и экспрессировали в Escherichia coli. Наличие рекомбинантного белка размером ∼57 кДа подтверждали с использованием Western Blot-анализа. Рекомбинантный белок очищали путем аффинной хроматографии. Очищенный препарат обладал высокой антивирусной активностью по отношению к вирусу табачной мозаики (ВТМ) на листьях растения-хозяина Nicotiana glutinosa, что указывает на наличие предполагаемой антивирусной детерминанты в выделенном фрагменте кДНК. Ранее было предположено, что антивирусная детерминанта находится внутри или очень близко к сайту инактивации рибосом. Мы предполагаем, что этот короткий фрагмент кДНК необходимо изучить для уточнения локализации антивирусной детерминанты. Последовательность выделенной кДНК была помещена в базу данных EMBL под номером AJ535714.
Текст статьи
Сноски
* Первоначально английский вариант рукописи был опубликован на сайте «Biochemistry» (Moscow), Papers in Рress, BM04-221, 27.02.2005.
** Адресат для корреспонденции и запросов оттисков.