Быстрое обнаружение ДНК-связывающей последовательности Quox-1 гомеодомена при помощи SAAB^*

Аннотация

Quox-1 − единственный ген Hox семейства, экспрессия которого происходит на всем протяжении развития центральной нервной системы (CNS). При помощи метода селекции связывания и амплификации (SAAB) с использованием Quox-1 гомеодомена, синтезированного в бактериальной системе экспрессии, мы идентифицировали в библиотеке случайных олигонуклеотидов сайты ДНК, с которыми связывается белок Quox-1. Оказалось, что белок Quox-1 узнает новую консенсусную последовательность 5′-CAATC-3′, с которой не связывается ни один другой гомеобелок Hox семейства. Кроме того, исследования подвижности молекул в электрическом поле подтвердили, что гомеобелок Quox-1 связывается преимущественно с последовательностью 5′-CAATC-3′, а не с сайтами связывания других гомеобелков Hox класса TAAT или NKX класса CAAG. На основании мутационного анализа последовательностей ДНК мы определили, что последовательность 5′-CAATC-3′ необходима для высокоспецифичного связывания с белком Quox-1. В свою очередь мутационный анализ Quox-1 гомеодомена показал, что одной из главных детерминант, участвующих в узнавании малой бороздки ДНК, являются Gln6 и Thr7 в N-концевой ветви гомеодомена.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: