БИОХИМИЯ, 2005, том 70, вып. 7, с. 974–979
УДК 577.15.02
Использование карты Рамачандрана для повышения термостабильности бактериальной формиатдегидрогеназы*
Кафедра химической энзимологии химического факультета МГУ им. М.В. Ломоносова
Поступила в редакцию 13.07.2004
После доработки 17.08.2004
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: формиатдегидрогеназа (ФДГ), Pseudomonas sp. 101, стабилизация, направленный мутагенез, конформационные напряжения, оптимизация конформации, β-изгиб, π-изгиб.
Аннотация
В результате анализа карты Рамачандрана для NAD+-зависимой формиатдегидрогеназы из метилотрофных бактерий Pseudomonas sp. 101 (ФДГ, КФ 1.2.1.2) в β- и π-изгибах полипептидной цепи ФДГ выявлено пять неконсервативных остатков (Asn136, Ala191, Tyr144, Asn234 и His263) с неоптимальными значениями углов φ и ψ. Для выяснения их роли в стабильности фермента данные остатки с помощью метода направленного мутагенеза заменили на остаток глицина. Мутация His263Gly вызвала дестабилизацию ФДГ и увеличение мономолекулярной константы скорости инактивации в 1,3 раза. Замены Ala191Gly и Asn234Gly на стабильность существенно не повлияли. Мутации Asn136Gly и Tyr144Gly привели к повышению термической стабильности фермента и снижению скорости инактивации в 1,2 и 1,4 раза соответственно. Показана аддитивность стабилизирующего эффекта мутации Tyr144Gly при ее введении в ранее полученную мутантную форму ФДГ с повышенной термостабильностью.
Текст статьи
Сноски
* Первоначально английский вариант рукописи был опубликован на сайте «Biochemistry» (Moscow), Papers in Press, BM04-188, 05.12.2004.
** Адресат для корреспонденции и запросов оттисков.