Конформационная стабильность и гемолитическая активность актинопорина RTX-SII из актинии Radianthus macrodactylus^*

Аннотация

Методами УФ-, КД-спектроскопии и собственной белковой флуоресценции изучена пространственная организация актинопорина RTX-SII из актинии Radianthus macrodactylus на уровне третичной и вторичной структур. Определены удельные и молярные коэффициенты поглощения RTX-SII. Вычислено процентное содержание канонических вторичных структур актинопорина. Установлено, что полипептид имеет довольно развитую третичную и высокоупорядоченную вторичную структуру, содержащую ~50% антипараллельных складчатых β-слоев. Методом КД-спектроскопии исследована необратимая тепловая денатурация RTX-SII. Определена точка конформационного перехода (53°), после которой необратимые изменения наблюдаются во вторичной и в третичной структурах. При этом происходит перераспределение содержания β-структуры в регулярном и искаженном видах, а также увеличение содержания неупорядоченной формы. Предполагается, что процесс тепловой денатурации происходит с образованием интермедиата. При кислотно-основном титровании необратимые изменения в пространственной структуре RTX-SII происходят при рН < 2,0 и > 12,0. Методом собственной белковой флуоресценции показано, что остатки тирозина RTX-SII вносят существенный вклад в эмиссию. При этом суммарная флуоресценция зависит от температуры и ионной силы раствора больше, чем триптофановая. Данные по конформационной стабильности RTX-SII сопоставлены с данными по его гемолитической активности. Активность RTX-SII резко уменьшается при повышении температуры раствора и незначительно – при понижении рН. При высоких значениях рН гемолитическая активность резко возрастает. Увеличение активности актинопорина при рН > 10,0 связано, вероятно, с ионизацией молекулы.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: