БИОХИМИЯ, 2005, том 70, вып. 7, с. 912–921
УДК 577.152.3
Выявление ингибиторных пептидов β-лактамазы с помощью двугибридной системы дрожжей*,**
1 School of Medicine, Tongji University
2 Department of Bio-Pharmaceutics, Shanghai Institute of Pharmaceutical Industry
Поступила в редакцию 12.02.2005
После доработки 25.02.2005
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: β-лактамаза, двугибридная система дрожжей, ингибиторный пептид β-лактамазы, система соединения пептид–GST.
Аннотация
Нами был сконструирован набор произвольных олигонуклеотидных фрагментов, содержащих последовательность, соответствующую коровому участку связывания β-лактамазы. Затем мы амплифицировали эти фрагменты, соединили их с активаторным доменом pGAD424 и в результате получили библиотеку произвольных пептидов. Для скрининга этой библиотеки с помощью двугибридной системы дрожжей мы амплифицировали кодирующий β-лактамазу фрагмент ДНК и соединили его со связывающим доменом pGBT9 (+2). Полученные в результате анализа библиотеки пептиды Р1 и Р2 связывали β-лактамазу in vivo. Гены, кодирующие Р1 и Р2, клонировали в pGEX-4T-1. Соединенные с GST пептиды экспрессировали в Escherichia coli и выделяли с помощью аффинной хроматографии на глютатион сефарозе 4В. Отделение пептидов Р1 и Р2 от GST проводили путем гидролиза тромбином и последующей ультрафильтрацией. При анализе ингибиторного действия этих пептидов на активность β-лактамазы in vivo мы показали, что только Р1 способен ингибировать ее активность.
Текст статьи
Сноски
* Ускоренная публикация.
** Первоначально английский вариант рукописи был опубликован на сайте «Biochemistry» (Moscow), Papers in Press, BM05-039, 01.05.2005.
*** Адресат для корреспонденции и запросов оттисков.