Легкие цепи иммуноглобулинов человека образуют фибриллы амилоида и гранулярные агрегаты в растворе^*

Аннотация

Миеломная нефропатия представляет собой заболевание, при котором в почках больных множественной миеломой откладываются агрегаты моноклональных легких цепей иммуноглобулинов человека. Существует два типа отложений легких цепей иммуноглобулинов – регулярные фибриллы амилоида и гранулярные (аморфные) агрегаты. Молекулярные механизмы, которые определяют формирование того или иного типа отложений легких цепей иммуноглобулинов в почках больных множественной миеломой, неизвестны. В данной работе исследована кинетика самоассоциации моноклональной легкой цепи λ иммуноглобулинов человека (GRY), которая выделена из мочи больного множественной миеломой. Основной молекулярной формой легкой цепи GRY в растворе при физиологических условиях является ковалентный димер (50,1 кДа). С помощью спектральных зондов, аналитической гель-фильтрации, вестерн-блот анализа и электронной микроскопии показано, что димер легкой цепи GRY иммуноглобулинов, в зависимости от условий микроокружения, формирует два разных типа ассоциатов – регулярные фибриллы амилоида и гранулярные агрегаты. Образование фибрилл амилоида происходит при перемешивании GRY (25 мкM) в фосфатно-солевом буферном растворе, рН 7,0, и фосфатно-солевом буферном растворе c мочевиной (0,8 М), рН 6,5, в течение 4–14 суток при 37°. Фибриллы имеют вид неветвящихся нитевидных образований размером ~60–80 × 1000 Å, способных связывать тиофлавин Т и конго красный. Образование гранулярных агрегатов белка, не имеющих регулярной четвертичной структуры, происходит при инкубации GRY в ацетатном буфере, рН 3,5. Посредством ковалентного сшивания белка гомобифункциональными реагентами исследована структура олигомеров GRY, которые формируются в растворе на ранних стадиях (1–4 сутки) образования фибрилл амилоида. Показано, что этими олигомерами являются тримеры и тетрамеры легкой цепи иммуноглобулинов.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: