БИОХИМИЯ, 2005, том 70, вып. 1, с. 85–96
УДК 577.152.361
Свободный PPi активирует гидролиз MgPPi неорганической пирофосфатазой Escherichia coli*
1 Химический факультет МГУ им. М.В. Ломоносова
2 Институт физико-химической биологии им. А.Н. Белозерского, МГУ им. М.В. Ломоносова
3 Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН
Поступила в редакцию 19.03.2004
После доработки 21.04.2004
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: неорганическая пирофосфатаза, гексамер, тример, эффекторный центр, активация пирофосфатом, замена Glu145Gln.
Аннотация
Растворимая неорганическая пирофосфатаза из Escherichia coli (Е-РРаза) – это гомогексамер, образующий в слабокислой среде активные тримеры. Ранее мы обнаружили, что гидролиз субстрата (MgPPi) под действием тримеров, а также мутантной Asp26Ala Е-РРазы не подчиняется уравнению Михаэлиса–Ментен. Для объяснения этого факта была предложена модель, предусматривающая существование наряду с активным эффекторного центра, связывающего PPi и обеспечивающего тем самым увеличение скорости гидролиза MgPPi. В настоящей работе показано, что неконкурентная активация гидролиза MgPPi свободным пирофосфатом объясняет кинетические особенности гексамеров, как нативного фермента, так и специально полученной мутантной Е-РРазы с заменой Glu145 в подвижной петле 144–149. Кроме PPi в эффекторном центре может связываться его негидролизуемый аналог – метилендифосфонат, также вызывая увеличение скорости гидролиза субстрата. Прямым доказательством существования в нативной Е-РРазе эффекторного центра является обнаружение связывания двух молей [32P]PPi с каждой субъединицей фермента.
Текст статьи
Сноски
* Первоначально английский вариант рукописи был опубликован на сайте «Biochemistry» (Moscow), Papers in Press, ВМ04-072, 27.06.2004.
** Адресат для корреспонденции и запросов оттисков.