Доказательство наличия остатков цистеина и лизина в составе или внутри активного центра аргининкиназы из Stichopus japonicus

Аннотация

Исследована инактивация аргининкиназы Stichopus japonicus о-фталевым альдегидом. Модифицированный фермент имел максимум поглощения при 337 нм и максимум флуоресценции при 410 нм, что соответствует производному изоиндола, образующемуся в результате присоединения о-фталевого альдегида к сближенным тиоловой и аминной группам. Инактивация фермента сопровождалась ростом интенсивности флуоресценции при 410 нм. Исследование стехиометрии методом Тсоу показало, что среди остатков цистеина, доступных для модифицирования о-фталевым альдегидом, только один важен для активности фермента. Этот остаток цистеина располагается в гидрофобном окружении, предположительно, возле центра cвязывания ATP и ADP. Это предположение было подтверждено модифицированием АК 5,5′- дитиобис(2-нитробензойной кислотой). Кроме того, вышеприведенные результаты были подтверждены методами электрофореза, быстрой жидкостной хроматографии белков, исследования флуоресценции в ультрафиолетовой области и кругового дихроизма. Анализ последовательности позволил предположить, что существенным остатком цистеина может быть консервативный остаток Cys274.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: