БИОХИМИЯ, 2004, том 69, вып. 10, с. 1381–1386

УДК 577.152.3

Плазмида pRARE в качестве вектора для клонирования при получении суперпродуцента сайт-специфической никазы N.BspD6I

© 2004 Е.А. Рогулин 1*, Т.А. Перевязова 1, Л.А. Железная 1, Н.И. Матвиенко 2

1 Институт теоретической и экспериментальной биофизики РАН

2 Институт белка РАН

Поступила в редакцию 18.02.2004
После доработки 22.03.2004

КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: сайт-специфические никазы, системы рестрикции-модификации, суперпродукция, редкие кодоны, pRARE.

Аннотация

Ген метилтрансферазы M.SscL1I, которая защищает ДНК от гидролиза никазой N.BspD6I, был введен в плазмиду pRARE, несущую редкие в E. coli гены тРНК. Введение гена sscML1I в pRARE обусловлено тем, что pRARE и плазмида, несущая ген sscML1I, не совместимы, так как содержат одинаковые сайты ori. После трансформации клеток E. coli TOP10F’ рекомбинантной плазмидой pRARE/MSsc и экспрессионным вектором рЕТ28b, содержащим ген никазы под промотором фага Т7, был получен штамм E. coli, производящий 7 · 105 единиц никазы N.BspD6I на 1 г сырой биомассы, что на два порядка превышает выход фермента из штамма, не содержащего pRARE/MSsc.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи:

captcha

Сноски

* Адресат для корреспонденции и запросов оттисков.