Фолдинг и стабильность химерного иммуноконъюгата VL-барстара^*

Аннотация

Рекомбинантный химерный белок VL-барстар, включающий VL-домен моноклонального антитела F11, направленного к ферритину человека, и природный ингибитор бактериальной РНКазы барназы сконструированы для исследования структурных и функциональных характеристик химерных иммуноконъюгатов. Потенциальным применением подобных конструкций является создание бивалентных и биспецифических антител на основе высокого сродства барназы и барстара (константа аффинности порядка 10¹⁴ М^–1). Нами разработан протокол экспрессии VL-барстара в Escherichia coli, очистки из бактериальных телец включения и рефолдинга, в результате чего получен гомогенный растворимый белок. С помощью дифференциальной сканирующей калориметрии, флуоресцентной и КД-спектроскопии показано, что VL-барстар формирует упорядоченную вторичную и компактную третичную структуры. В то же время установлена потеря значительной части третичных взаимодействий, приводящая к низкой стабильности химерного белка и отсутствию активности обоих составляющих модулей. Эти данные позволяют отнести химерный белок к классу нативных расплавленных глобул (native molten globules), который включает стабильные, но частично разупорядоченные при физиологических условиях белки. Учитывая, что VL-домен и барстар при экспрессии в виде индивидуальных белков сохраняют компактную и стабильную пространственную структуру, причиной неполного фолдинга химерного белка следует считать взаимодействие гетерологичных доменов, возникающее на стадии фолдинга, предшествующей образованию системы третичных взаимодействий в обоих структурных модулях. Полученные результаты подтверждают возможность ненативных взаимодействий между гетерологичными модулями в химерных белках.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: