Фотопревращение хромофора флуоресцентного белка из Dendronephthya sp.

Аннотация

Отличительной чертой зеленого флуоресцентного белка из коралла Dendronephthya sp. (Dend FP) является необратимое светозависимое превращение в форму, излучающую красный свет. В данной работе исследованы молекулярные основы этого явления. При облучении УФ – светом (366 нм) в спектрах поглощения этого белка наблюдался переход со сдвигом максимума поглощения от 494 нм (зеленая форма) к 557 нм (красная форма). Одновременно в спектрах флуоресценции максимум эмиссии смещался от 508 к 575 нм. Установлено, что зеленая форма нативного Dend FP представляет собой димер, и степень олигомеризации этого белка не изменяется в процессе его превращения в красную форму. Напротив, облучение УФ светом приводило к существенным внутримолекулярным изменениям. В отличие от зеленой формы, мигрирующей в Ds-Na-ПАА гелях в виде единственной зоны, соответствующей массе 28 кДа полноразмерного белка, красная форма Dend FP представляла собой набор из двух фрагментов с массами 18 и 10 кДа. С целью выяснения химической природы всех этих явлений денатурированная красная форма Dend FP была подвергнута протеолитическому расщеплению трипсином. Из триптического гидролизата с помощью ЖХВД был выделен хромофорсодержащий пептид. С помощью методов ЭСИ и тандемной масс-спектрометрии (ЭСИ/МС/МС), а также ЯМР-спектроскопии установлена структура хромофора красной формы Dend FP. Полученные данные позволяют объяснить причину светозависимого превращения Dend FP образованием дополнительной двойной связи в боковой цепи His 65 и последующим расширением системы сопряжения хромофора зеленой формы. Таким образом, Dend FP следует отнести к Kaede подсемейству GFP-подобных белков в классификации по типу структуры хромофора.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: