БИОХИМИЯ, 2004, том 69, вып. 7, с. 989–992
УДК 577.212
Ингибирование трансаминирования [15N]валина при селективном мечении барстара в T7-полимеразной системе
Казанский институт биохимии и биофизики Казанского научного центра РАН
Поступила в редакцию 06.06.2003
После доработки 19.09.2003
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: стабильные изотопы, ЯМР, трансаминазы, α-аминооксиуксусная кислота, барстар.
Аннотация
Оптимизирован процесс селективного мечения барстара по аминокислотным остаткам валина стабильным изотопом 15N с высокой степенью селективности включения метки при экспрессии гена барстара в клетках Escherichia coli BL21(DE3). Показано, что ингибитор трансаминаз α-аминооксиуксусная кислота (АОУК) уменьшает скорость перераспределения изотопа азота, что проявляется в существенном увеличении селективности включения [15N]Val на спектрах двумерного 1H-[15N]-ЯМР. Проведенная нами количественная оценка спектров барстара позволила определить процент включения изотопно-меченного валина, который в случае применения АОУК составил 96%. Исследование динамики синтеза барстара позволило сделать вывод, что в условиях регуляции T7-полимеразной экспрессионной системы изопропилтио-β-D-галактозидом и рифампицином при использовании АОУК не наблюдается существенного подавления выхода барстара.
Текст статьи
Сноски
* Адресат для корреспонденции и запросов оттисков.