Рекомбинантный дестабилаза-лизоцим: синтез de novo в Escherichia coli и механизм действия фермента, экспрессированного в Spodoptera frugiperda

Аннотация

Дестабилаза-лизоцим (ДЛ) из секрета слюнных желез медицинской пиявки (Hirudo medicinalis) – представитель семейства лизоцимов беспозвоночных, отличных от других семейств. В настоящем исследовании анализируются функции ДЛ при экспрессии в Escherichia coli гена, кодирующего этот фермент. Использовалось несколько конструкций экспрессионных векторов pKK OmpA и pET-3A, содержащих или лишенных сигнальных пептидов бактериального, пиявочного или дрожжевого происхождения. Использование конструкций без сигнальных пептидов приводило к нормальному росту клеток. При трансформации E. coli с помощью конструкций, содержащих сигнальные пептиды, наблюдалось разрушение образующихся клеток. При использовании экспрессионного вектора pET-32 LTC-System, предполагающего образование в цитоплазме ДЛ в виде гибридного белка с тиоредоксином, также наблюдали нормальный клеточный рост. Однако удельная лизоцимная активность ДЛ, выделенного из таких клеток, значительно ниже, чем активность фермента, очищенного иммуносорбцией из экстрактов клеток Spodoptera frugiperda, инфицированных бакуловирусом, несущим кДНК дестабилаза-лизоцима. Впервые показано, что механизм действия i-лизоцимов не отличается от такового других семейств: pекомбинантный ДЛ из экстрактов S. frugiperda катализирует расщепление синтетического субстрата, гексамера N-ацетилглюкозамина до ди- и тетрамеров, что характерно для известных семейств лизоцимов.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: