Протеиназа человека HtrA2: температурная зависимость протеиназной активности и структурные свойства

1 Department of Biological Science and Biotechnology, Tsinghua University

2 The Protein Science Laboratory of the Education Ministry, Tsinghua University

Поступила в редакцию 03.12.2003
После доработки 12.01.2004

КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: HtrA2, протеиназа, температура, протеолитическая активность, структурные изменения.

Аннотация

Протеиназа человека HtrA2 относится к новому классу олигомерных сериновых протеиназ, которые присутствуют в большинстве организмов. Зрелая HtrA2 освобождается из митохондрий в цитоплазму при стимуляции апоптоза. В данной работе исследовано влияние температуры на протеолитическую активность HtrA2 и ее структурные свойства. Показано, что протеолитическая активность HtrA2 быстро увеличивается с ростом температуры в интервале от 25 до 55°, начиная резко снижаться при достижении 60°. Исследования структуры фермента методами КД спектроскопии в дальнем ультрафиолете и гель-фильтрации не выявили существенных изменений ни во вторичной структуре HtrA2 при 25–70°, ни в олигомерной структуре фермента при 25–55°. Однако спектры КД в ближнем ультрафиолете обнаружили существенное изменение третичной структуры HtrA2 при нагревании от 25 до 60°. Начало температурного перехода для HtrA2 было зарегистрировано методом дифференциальной сканирующей калориметрии при 61°. Интенсивность флуоресценции ANS при взаимодействии HtrA2 возрастала с увеличением температуры. Показано, что протеиназа HtrA2 может выполнять функции протеиназы DegP при 44°, что свидетельствует о защитной роли HtrA2 в митохондриях.

Текст статьи

Сноски

* Адресат для корреспонденции и запросов оттисков.