Значение кодонового состава и неравномерности распределения редких кодонов по гену для экспрессии ДНК-метилтрансфераз системы BspLU11III

Аннотация

Гены двух ДНК-метилтрансфераз (адениновой М.BspLU11IIIa и цитозиновой М.BspLU11IIIb), принадлежащих системе рестрикции–модификации типа IIG BspLU11III из термофильного штамма Bacillus species LU11, экспрессированы в Escherichia coli. Эти гены содержат большое количество редких для E. coli кодонов и характеризуются одинаковыми значениями индекса кодонового соответствия (CAI) и показателя степени экспрессии (E(g)). Однако в гене адениновой ДНК-метилтрансферазы редкие кодоны расположены диффузно по гену, а в гене цитозиновой ДНК-метилтрансферазы содержатся кластеры редких кодонов. Введение в клетку плазмиды pRARE, несущей гены тРНК шести редких для E. coli кодонов, в ~7,3 раза повышает эффективность экспрессии гена цитозиновой ДНК-метилтрансферазы и всего в 1,25 раза адениновой. Можно предположить, что плазмида с генами минорных тРНК способна сильно увеличивать экспрессию генов только с кластерным расположением редких кодонов. Обе ДНК-метилтрансферазы выделены и очищены с помощью хроматографии на гепарин-сефарозе, фосфоцеллюлозе и гель-фильтрации на сефадексе G-75 до гомогенного состояния (по данным Ds-Na-ПААГ-электрофореза).

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: