Делеция N-концевых аминокислотных остатков лактатдегидрогеназы из мышц кролика: влияние на свойства фермента

Аннотация

C целью исследования функций N-концевых аминокислотных остатков лактатдегидрогеназы из мышц кролика при помощи полимеразной цепной реакции (ПЦР) были сконструированы делеционные мутанты фермента. Кодирующие последовательности первых пяти (LD5) или десяти (LD10) N-концевых аминокислотных остатков удаляли и полученные последовательности включали в прокариотический вектор экспрессии pET21b. Мутантные ферменты были экспрессированы в клетках E. сoli BL21/DE3 и очищены; исследованы их свойства и стабильность. Показано, что удаление десяти аминокислотных остатков приводит к полной инактивации лактатдегидрогеназы, однако мутантный фермент LD10 способен к частичной реактивации в присутствии стабилизирующих ионов. Удаление 5 или 10 N-концевых аминокислотных остатков не влияет на олигомерную структуру фермента: мутантные формы LD5 и LD10 являются тетрамерами. Стабильность лактатдегидрогеназы дикого типа (RW-LD) и мутантных форм LD5 и LD10 исследовали путем инкубации ферментов при низких значениях pH, при повышенной температуре и в присутствии GuHCl. Результаты исследования показали, что мутантные ферменты с делецией N-концевых аминокислотных остатков более чувствительны к денатурирующим воздействиям, они легко инактивируются и разворачиваются. С увеличением числа удаленных N-концевых аминокислотных остатков снижаются стабильность мутантных ферментов, а также их способность к ренатурации. Полученные результаты являются доказательством важной роли N-концевых аминокислотных остатков лактатдегидрогеназы в стабилизации структуры и обеспечении функционирования фермента.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: