Очистка и свойства экзополифосфатазы цитозоля Saccharomyces cerevisiae, не кодируемой геном PPX1

Аннотация

Из цитозоля дрожжей Saccharomyces cerevisiae, выращенных до стационарной стадии роста после их пересева с дефицитной по фосфату на полноценную среду, выделена новая экзополифосфатаза. Она не кодируется геном 40 кДа-экзополифосфатазы PPX1. Удельная активность препарата составляет 150 Е на 1 мг белка, степень очистки – 319 раз, выход – 16,9%. Минимальная молекулярная масса активного, но нестабильного ферментного комплекса составляет ~125 кДа. В состав стабильного ферментного комплекса с молекулярной массой ~500 кДа входят два полипептида (~32 и 35 кДа) и, по-видимому, полифосфаты (полиР). В отличие от фермента, кодируемого геном PPX1, высокомолекулярная экзополифосфатаза слабо гидролизует полиР₃, не ингибируется антителами, подавляющими активность 40 кДа-экзополифосфатазы, ингибируется ЭДТА и в меньшей степени стимулируется двухвалентными катионами. Высокомолекулярная экзополифосфатаза гидролизует полиР со средней длиной цепи от 208 до 15 фосфатных остатков с одинаковой степенью эффективности, не гидролизует АТР, РР_i и р-нитрофенилфосфат. Активность с полиР₃ составляет 13% от активности с полиР₂₀₈. К_m составляет 3,5, 75 и 1100 мкМ для полиР₂₀₈, полиР₁₅ и полиР₃ соответственно. Фермент наиболее активен при рН ~7. Ионы Co²⁺ при оптимальной концентрации 0,1 мМ стимулируют активность в 6 раз, а ионы Mg²⁺ при оптимальной концентрации 1 мМ – в 2 раза. По некоторым свойствам исследуемый фермент обнаруживает сходство с экзополифосфатазой, очищенной ранее из вакуолей дрожжей.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: