БИОХИМИЯ, 2004, том 69, вып. 4, с. 467–472
УДК 577.172
Очистка и физико-химические свойства изоцитратлиазы из куколок бабочек Papilio machaon L.
Кафедра биохимии и физиологии растений Воронежского государственного университета
Поступила в редакцию 07.04.2003
После доработки 20.05.2003
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: глиоксилатный цикл, изоцитратлиаза, малатсинтаза, кинетические характеристики, диапауза.
Аннотация
В куколке бабочки Papilio machaon L. обнаружены ключевые ферменты глиоксилатного цикла – изоцитратлиаза и малатсинтаза. Активность этих ферментов составила 0,056 и 0,108 ед. на 1 мг белка куколки соответственно. С помощью пятистадийной очистки, включающей фракционирование сульфатом аммония, ионообменную хроматографию на ДЭАЭ-Toyopearl и гель-фильтрацию, получен электрофоретически гомогенный препарат изоцитратлиазы с удельной активностью 5,5 ед. на 1 мг белка, что соответствует 98-кратной степени очистки и выходу 6%. Показано, что фермент подчиняется кинетике Михаэлиса–Ментен (Кm по изоцитрату 1,4 мМ), конкурентно ингибируется сукцинатом (Кi = 1,8 мМ) и малатом (Кi = 1 мМ). Изучение физико-химических свойств показало, что изоцитратлиаза является изологическим димером с молекулярной массой субъединиц 68 ± 2 кДа; рН-оптимум для исследуемого фермента в Тris-HCl-буфере равен 7,5.
Текст статьи
Сноски
* Адресат для корреспонденции и запросов оттисков.