БИОХИМИЯ, 2004, том 69, вып. 3, с. 344–350

УДК 577.27

Получение антител к GM3-синтазе человека и иммунологическое определение этого фермента в человеческих тканях

© 2004 Н.К. Голованова 1*, Н.Н. Самовилова 1, Е.В. Грачева 1, М.М. Пекло 1, Т.Н. Власик 1, А.Ю. Соболев 2, Ю.В. Юрченко 2, Н.В. Проказова 1

1 Институт экспериментальной кардиологии Российского кардиологического научно-производственного комплекса МЗ РФ

2 Институт молекулярной генетики РАН

Поступила в редакцию 18.07.2003

КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: активность GM3-синтазы, антитела к GM3-синтазе, печень человека, клетки HL-60.

Аннотация

В настоящей работе мы получили поликлональные антитела к клонированному фрагменту GM3-синтазы человека. Аффинно очищенные антитела R27C1 к рекомбинантному белку дозозависимо подавляли активность GM3-синтазы печени и клеток HL-60. В то же время антитела R27C1 не влияли на сиалилтрансферазную активность печени по отношению к асиалофетуину. Нами впервые определена активность GM3-синтазы в печени человека (194 ± 60 пмоль NeuAc/ч на 1 мг белка), которая была почти на порядок ниже, чем в стимулированных форболовым эфиром клетках HL-60 (1353 ± 573 пмоль NeuAc/ч на 1 мг белка). В иммуноблоттинге антитела R27C1 выявляли белковую полосу с молекулярной массой ~60 кДа в ряде тканей человека (печени, мозге, атеросклеротической интиме аорты, клетках HL-60), что совпадает с данными для очищенной GM3-синтазы печени крыс. В печени и интиме 60 кДа-полоса была основной, что позволяет использовать антитела R27C1 для иммуногистохимического изучения GM3-синтазы в срезах этих тканей.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи:

captcha

Сноски

* Адресат для корреспонденции и запросов оттисков.