Исследование взаимодействия репликативного белка A с фотоактивными структурами ДНК

Аннотация

Синтезировано новое фотоактивное производное олигонуклеотида, несущее перфторарилазидогруппу в 2′-положении рибозного фрагмента 5′-концевого нуклеотида. С использованием полученного конъюгата созданы фотореакционноспособные комплексы ДНК, содержащие одноцепочечные участки различной длины, одноцепочечные разрывы (ники), а также полный дуплекс, несущий фотоактивную группу внутри одной цепи. Эти структуры моделируют ДНК-интермедиаты, возникающие на разных этапах репликации и репарации ДНК. С помощью методов фотоаффинной модификации и задержки в геле исследовано взаимодействие репликативного белка A (RPA) с полученными ДНК-структурами. Показано, что, независимо от структуры ДНК, происходит модификация только большой субъединицы RPA (р70), причем интенсивность ее мечения увеличивается с уменьшением размеров одноцепочечного участка и является максимальной в случае ДНК-структуры, содержащей ник. Методом задержки в геле показано наиболее эффективное связывание RPA с этой структурой, тогда как комплексообразование RPA с ДНК, содержащей немодифицированный ник, а также с полным дуплексом, несущим фотоактивную группу внутри цепи, происходило со значительно меньшей эффективностью. Полученные данные могут свидетельствовать в пользу того, что RPA чувствителен к подобным повреждениям в двуспиральной структуре ДНК.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: