Олигонуклеосомная фрагментация ДНК клеток MCF-7 при апоптозе, индуцированном пальмитатом Na

Аннотация

Олигонуклеосомная фрагментация ядерной ДНК является поздним этапом апоптотического процесса и осуществляется каспазо-зависимой ДНКазой DFF40/CAD. Активация DFF40/CAD при апоптозе происходит благодаря специфическому протеолитическому расщеплению ингибитора этой ДНКазы – DFF45/ICAD. Сайт-специфичное расщепление DFF45/ICAD осуществляет активная каспаза 3. Известно, что в результате делеции в гене каспазы 3 в клетках аденокарциномы MCF-7 не экспрессируется этот ключевой элемент апоптотического каскада, и апоптоз MCF-7 под действием фактора некроза опухолей альфа (TNF-α) не сопровождается олигонуклеосомной фрагментацией ДНК. В настоящей работе установлено, что апоптоз casp3-мутантных MCF-7, индуцированный пальмитатом Na, но не TNF-α, сопровождается апоптотическими изменениями ядер и олигонуклеосомной фрагментацией ядерной ДНК. С помощью зимографического анализа в денатурирующем ДНК-ПААГ показано, что под действием пальмитата в клетках MCF-7 активируются DFF40-подобные ДНКазы с молекулярной массой 40–50 кДа. Установлено также, что микросомальная фракция MCF-7, погибающих под действием пальмитата, способна вызывать олигонуклеосомную фрагментацию ДНК хроматина плаценты человека в бесклеточной системе. Инкубация хроматина с микросомами апоптотических клеток MCF-7 сопровождается активацией 40–50 кДа ДНКаз. Процесс активации DFF40-подобных ДНКаз, а также олигонуклеосомная фрагментация ДНК хроматина эффективно подавляются ингибитором каспазы 3/7 Ac-DEVD-CHO. Полученные данные позволяют предположить, что основным активатором апоптотических ДНКаз и индуктором олигонуклеосомной фрагментации хроматина при пальмитат-индуцированной гибели casp3-дефицитных MCF-7 является каспаза 7.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: