БИОХИМИЯ, 2003, том 68, вып. 12, с. 1624–1630

УДК 577.123

Термостабильная ДНК-полимераза из Thermus thermophilus В35: получение и изучение свойств модифицированной формы фермента, обладающей повышенным сродством к ddNTP

© 2003 А.Г. Акишев 1*, H.И. Речкунова 2, Ю.Э. Томилова 3, H.А. Лебедева 2, О.И. Лаврик 2, С.Х. Дегтярев 1

1 Институт молекулярной биологии и биофизики Сибирского отделения Российской академии медицинских наук

2 Новосибирский институт биоорганической химии Сибирского отделения Российской академии наук

3 НПО «СибЭнзим»

Поступила в редакцию 17.02.2003
После доработки 23.05.2003

КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: термостабильная ДНК-полимераза, сайт-направленный мутагенез, дидезоксинуклеозидтрифосфаты, секвенирование ДНК.

Аннотация

Получен гибридный белок, состоящий в соотношении 20 : 1 из фрагментов ДНК-полимеразы Tte и мутантной (F667Y) ДНК-полимеразы Taq. Показано, что такая модифицированная форма фермента (замены F669Y, V667I и S692Q) имеет сродство к ddNTP на два порядка выше, чем фермент «дикого» типа. Модифицированный фермент использован для секвенирования фрагмента ДНК с суммарным содержанием дезоксигуанозина и дезоксицитидина 68%. Показано, что в полимеразной цепной реакции модифицированный фермент сохраняет свойства, присущие ферменту «дикого» типа.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи:

captcha

Сноски

* Адресат для корреспонденции и запросов оттисков.