Конформационные различия нативной и рекомбинантной форм пероксидазы хрена, выявляемые методом тритиевой планиграфии

Аннотация

Значительные конформационные различия между нативной и рекомбинантной формами пероксидазы хрена показаны с помощью метода тритиевой планиграфии. Сравнение распределения радиоактивности по аминокислотным остаткам с их теоретической (расчетной) доступностью позволило сделать вывод о большей гидрофобности и компактности рекомбинантного фермента. Подтверждена протекторная роль «олигосахаридной шубы» у нативного фермента. Неожиданным результатом исследования явилось обнаружение большей доступности каталитического остатка гистидина в растворе. Достоверно продемонстрировано влияние низких доз радиации (3 Гр) на доступность аминокислотных остатков. В случае рекомбинантного фермента полученные данные могут быть интерпретированы как «разбухание» и увеличение гидрофильности поверхности под действием радиации. В случае нативного фермента радиация не оказывает существенного влияния на экспонированность аминокислотных остатков, что косвенно указывает на избыточную модификацию нативного фермента в клетке. Исключением является остаток гистидина, который становится недоступным после облучения в нативном ферменте, в то время как в рекомбинантном ферменте его доступность после облучения увеличивается. Пятикратное падение каталитической константы для облученного нативного фермента дополнительно указывает на деструктивное действие радиации на дистальный домен фермента и возможное «проседание» активного центра.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: