БИОХИМИЯ, 2003, том 68, вып. 11, с. 1471–1479
УДК 577.152.4
Роль остатка Arg226 в механизме действия триптофан–индол-лиазы из Proteus vulgaris*
1 Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН
2 Институт элементоорганических соединений им. А.Н. Несмеянова РАН
3 Department of Biological Sciences, State University of New York at Buffalo
Поступила в редакцию 27.05.2003
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: триптофан–индол-лиаза, Proteus vulgaris, пиридоксаль-5'-фосфат, сайт-направленный мутагенез.
Аннотация
В пространственной структуре триптофаназы из Proteus vulgaris гуанидиновая группа Arg226 образует солевой мостик с 3′-атомом кислорода кофермента. Замена этого остатка на аланин методом сайт-направленного мутагенеза привела к снижению сродства кофермента к белку на один порядок по сравнению с ферментом дикого типа. Каталитическая активность мутантной формы фермента в реакции с L-триптофаном уменьшилась на пять порядков по сравнению с ферментом дикого типа. Скорости реакций с некоторыми другими субстратами уменьшились на три-четыре порядка. Мутантный фермент катализировал обмен С-α-протона в комплексах с некоторыми ингибиторами со скоростью, на два порядка меньшей, чем фермент дикого типа. Спектры поглощения и кругового дихроизма мутантной формы фермента и фермент–ингибиторных комплексов свидетельствуют, что замена Arg 226 на Ala не сказывается на таутомерном равновесии внутреннего альдимина, но приводит к нарушению оптимальной конформации кофермент-субстратных интермедиатов.
Текст статьи
Сноски
* Ускоренная публикация.
** Адресат для корреспонденции и запросов оттисков.