Исследование взаимодействия флэпэндонуклеазы-1 с репликативным белком A с использованием фотоактивных интермедиатов репарации ДНК

Аннотация

Разработан способ получения флэп-структур, содержащих в точке ветвления фотореакционноспособный остаток dCMP, несущий в экзо–N-положении цитозина 4-(4-азидо-2,3,5,6-тетрафторбензилиден­гидразино­карбонил)бутилкарбониламино группу. Методами задержки в геле и фотоаффинной модификации показано формирование комплексов полученных флэп-структур с флэпэндонуклеазой-1. Исследованы субстратные свойства флэп-структур с различной длиной свисающей одноцепочечной части в реакции эндонуклеазного расщепления, катализируемого флэпэндонуклеазой-1. Показано, что ингибирование активности флэпэндонуклеазы-1 репликативным белком A зависит от размера одноцепочечной части флэп-субстрата. При длине свисающего участка, достаточной для эффективного связывания репликативного белка A, наблюдалось существенное ингибирование расщепления, в то время как для структур с короткой одноцепочечной частью эффективность расщепления не зависела от присутствия репликативного белка A. Проведена фотоаффинная модификация флэпэндонуклеазы-1 и репликативного белка A флэп-структурами, для которых длина свисающего одноцепочечного участка составляла 8 или 21 нуклеотид. Продукты фотопришивок ДНК к флэпэндонуклеазе-1 наблюдались в обоих случаях, тогда, как ковалентные аддукты с репликативным белком A удалось зафиксировать лишь при использовании структуры с длиной флэпа в 21 нуклеотид. Методом фотоаффинной модификации продемонстрирована конкуренция флэпэндонуклеазы-1 и репликативного белка A за связывание флэп-субстратов с длинными одноцепочечными участками.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: