Очистка и характеристика Ca²⁺, Mg²⁺-, Ca²⁺, Mn²⁺-зависимых и кислой ДНКаз из сперматозоидов морского ежа Strongylocentrotus intermedius

Аннотация

Из сперматозоидов морского ежа Strongylocentrotus intermedius выделены Ca²⁺, Mg²⁺-, Ca²⁺, Mn²⁺-зависимые и кислая ДНКазы. Схема очистки включает последовательную хроматографию на ДЭАЭ-целлюлозе, фенилсефарозе, Source 15Q и гель-фильтрацию. Определены основные физико-химические и ферментативные свойства выделенных ферментов. Показано, что Ca²⁺, Mg²⁺-зависимая ДНКаза (Ca, Mg-ДНКаза) является ядерным белком с молекулярной массой 63 кДа в нативной форме и рН-оптимумом активности 7,5. Активность фермента в присутствии ионов двухвалентных металлов убывает в ряду (Ca²⁺ + Mg²⁺) > Mn²⁺ = (Ca²⁺ + Mn²⁺) > (Mg²⁺ + ЭГТА) > Ca²⁺. Показано, что Ca, Mg-ДНКаза сохраняет максимальную активность в морской воде, не ингибируется G-актином и N-этилмалеимидом и ингибируется ионами Zn²⁺. Установлено, что эндогенная Ca, Mg-ДНКаза расщепляет хромосомную ДНК спермиев по межнуклеосомным участкам. Ca²⁺, Mn²⁺-Зависимая ДНКаза (Ca, Mn-ДНКаза) имеет молекулярную массу 25 кДа в нативной форме и рН-оптимум активности 8,5. Активность фермента в присутствии ионов двухвалентных металлов убывает в ряду (Ca²⁺ + Mn²⁺) > (Ca²⁺ + Mg²⁺) > Mn²⁺ > (Mg²⁺ + ЭГТА). В морской воде фермент неактивен. Ионы цинка ингибируют Ca, Mn-ДНКазу. Показано, что кислая ДНКаза спермиев (К-ДНКаза) с молекулярной массой 37 кДа в нативной форме и рН-оптимумом активности 5,5 не является ядерным белком, не активируется ионами двухвалентных металлов, ингибируется N-этилмалеимидом и иодуксусной кислотой. Установлены механизмы эндонуклеазного расщепления двухцепочечной ДНК для трех ферментов. Обсуждается вероятность участия ДНКаз спермиев морского ежа в программированной гибели клеток.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: