Новая бинарная система для фотосенсибилизированной модификации ДНК-полимераз в ядерном экстракте

Аннотация

Осуществлена фотосенсибилизированная модификация белков ядерного экстракта семенников крупного рогатого скота с использованием бинарной системы реагентов. В качестве фотореагента впервые в такой системе был использован аналог dUTP, содержащий 4-азидо-2,5-дифтор-3-хлорпиридильную группу (FAP-dUTP), а в качестве сенсибилизатора – аналог dUTP, содержащий пиренильную группу (Pyr-dUTP). Модификацию белков ядерного экстракта проводили с использованием радиоактивно меченного ДНК-дуплекса, содержащего фотореакционноспособную FAP-группу на 3′-конце растущей цепи ДНК и аналог остатка дезоксирибозофосфата (3-гидрокси-2-гидроксиметилтетрагидрофуран (F) 5′-фосфат) на 5′-конце ника. Такая структура была сформирована под действием ферментов ядерного экстракта из исходного ДНК-дуплекса, содержащего синтетический апуриновый/апиримидиновый сайт, и представляет собой фотореакционноспособный аналог интермедиата длиннозаплаточной эксцизионной репарации оснований. Облучение УФ-светом приводило к модификации ограниченного числа белков ядерного экстракта. Использование новой бинарной системы фотореагентов позволило увеличить эффективность мечения одного из белков – ДНК-полимеразы β, как было показано с использованием специфических антител.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: