БИОХИМИЯ, 2003, том 68, вып. 3, с. 366–374

УДК 577.212.3

Термостабильная ДНК-полимераза из термофильного микроорганизма archaeon Archaeoglobus fulgidus VC16 и ее свойства

© 2003 С.Е. Чалов 1, О.Л. Воронина 2, О.В. Сергиенко 2, В.Г. Лунин 2*

1 Химический факультет МГУ им. М.В. Ломоносова

2 Всероссийский научно-исследовательский институт сельскохозяйственной биотехнологии Российской академии сельскохозяйственных наук им. К.А. Тимирязева

Поступила в редакцию 25.10.2001
После доработки 24.12.2001

КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: термостабильная ДНК-полимераза, A. fulgidus, амплификация ДНК, экзонуклеазная активность, термостабильность.

Аннотация

Клонирован ген (№ AF0497 GenBank, США) из штамма archaeon Archaeoglobus fulgidus, обнаруженного в воде горячих источников, содержащий открытую рамку считывания 2346 пар олигонуклеотидов, кодирующий термостабильную ДНК-полимеразу (762 аминокислотных остатка). Из полученного штамма-продуцента Escherichia coli выделен и охарактеризован рекомбинантный белок Afu-pol с молекулярной массой 94 кДа. C использованием сайт-направленного мутагенеза в гене afu-pol была проведена замена аминокислотного остатка Glu170 на Ala, что привело к полной потере 3’–5′-экзонуклеазной активности фермента. Таким образом, полученные данные позволяют заключить, что остаток Glu170 непосредственно участвует в формировании 3’–5′-экзонуклеазного центра. Изучены физико-химические свойства экзодефицитной формы фермента и показана возможность использования Afu(exo–)-pol в полимеразной цепной реакции.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи:

captcha

Сноски

* Адресат для корреспонденции и запросов оттисков.