БИОХИМИЯ, 2003, том 68, вып. 3, с. 336–348

УДК 577.27

Экспонирование нового антигенного эпитопа в каталитической субъединице вискумина во время внутриклеточного транспорта*

© 2003 А.Г. Тоневицкий 1**, И.И. Агапов 1, М.М. Мойсенович 1, Н.В. Малюченко 1, В.С. Пашков 2, Т.А. Балашова 2, М.П. Кирпичников 1

1 Биологический факультет МГУ им. М.В. Ломоносова

2 Институт биоорганической химии им. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН

Поступила в редакцию 10.11.2002

КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: вискумин, рицин, моноклональные антитела, эпитопный анализ, 1Н-ЯМР-спектроскопия.

Аннотация

Растительный токсин вискумин (60 кДа) состоит из двух субъединиц (30 кДа), связанных дисульфидной связью. Связывающая субъединица (В, binding) – лектин, который взаимодействует с гликолипидами и гликопротеинами клеточной поверхности, содержащими концевую галактозу. Каталитическая субъединица (А, active) – фермент N-гликозидаза, которая модифицирует 28S РНК рибосом, необратимо ингибируя белковый синтез в клетке. После связывания и рецептор-опосредованного эндоцитоза токсин в составе везикул транспортируется ретроградно и достигает эндоплазматического ретикулума, где происходит транслокация каталитической субъединицы в цитоплазму. Возможно, для транслокации через мембрану необходимо разворачивание каталитической субъединицы. Для идентификации эпитопов, которые появляются в белке при этом разворачивании, нами получены гибридомы против денатурированной формы белка. Устойчивость гибридомных клеток к действию токсина свидетельствует о взаимодействии токсина и антител внутри клетки. Гибридомные клетки ТА7 против эпитопа, который отсутствует в нативном белке и появляется при денатурировании вискумина, устойчивы к цитотоксическому действию токсина, что свидетельствует о взаимодействии антитела и токсина до трансмембранного перехода каталитической субъединицы в цитоплазму. Таким образом, устойчивость гибридомных клеток говорит о появлении нового эпитопа во время движения токсина внутри везикул. Синтезированы 65 перекрывающихся октапептидов и методом иммуноферментного анализа локализованы участки связывания на каталитической субъединице для моноклонального антитела ТА7 и поликлональной сыворотки. По результатам эпитопного картирования синтезирован пептид А96-ETHLFTGT-T105. Методом 1H-ЯМР-спектроскопии изучено связывание данного пептида с моноклональным антителом ТA7 и определена конформация антигенной детерминанты (L100-FTGT-T105) в комплексе с антителом.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи:

captcha

Сноски

* Ускоренная публикация.

** Адресат для корреспонденции и запросов оттисков.