Индуцированная полоса поглощения холотранскетолазы и ее интерпретация

Аннотация

Известно, что образование каталитически активной холотранскетолазы из апофермента и тиаминдифосфата (ТДФ) сопровождается появлением в спектрах поглощения и КД новой полосы. Связывание и последующее превращение субстратов вызывает изменение ее интенсивности. Все это давало возможность исследовать процесс связывания кофермента с апобелком и превращение субстратов в транскетолазной реакции и определять константы индивидуальных стадий этих процессов. Природа новой, индуцированной связыванием ТДФ полосы поглощения до последнего времени оставалась неизвестной. Причиной ее появления считали либо образование комплекса с переносом заряда между ТДФ и остатком триптофана, или фенилаланина, либо стекинг-взаимодействие между остатками ароматических аминокислот, сближающихся в результате изменения конформации апобелка при его взаимодействии с коферментом. Однако ни одна из предложенных гипотез не получила экспериментального подтверждения. Сущность предлагаемой нами гипотезы заключается в том, что причиной индуцированной полосы поглощения является иминоформа самого ТДФ, образование которой обусловлено тремя особенностями коферментсвязывающего центра транскетолазы: относительной гидрофобностью центра, образованием водородной связи между N1′-атомом аминопиримидинового кольца ТДФ и остатком Glu418 и стекинг-взаимодействием aминопиримидинового кольца ТДФ и остатка Phe445.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: