Характеристика ферментативной активности протеинкиназы LOSK: возможная регуляторная роль структурного домена

Аннотация

Протеинкиназы млекопитающих LOSK (LOng Ste20-like Kinase) принадлежат к недавно выделенному семейству киназ GCK, участвующих в индукции апоптоза. LOSK имеют N-концевой кислый каталитический домен и длинный С-концевой основной структурный домен, отщепляемый в клетках каспазами при развитии апоптоза. Для изучения ферментативной активности LOSK и влияния на нее структурного домена получили два препарата этой протеинкиназы: природный полноразмерный белок, иммунопреципитированный из культивируемых клеток CHO-K1, и синтезированный в E. coli рекомбинантный N-концевой каталитический фрагмент. Оба препарата обладали как способностью к автофосфорилированию, так и способностью фосфорилировать MBP и гистон Н1, и активность обоих препаратов была сравнимой. Гистон H1 оказался лучшим субстратом для LOSK, чем казеин, а АТР – лучшим, чем другие нуклеотиды. Зависимость активности от рН для иммунопреципитированного белка была более выраженной, чем для его рекомбинантного фрагмента, лишенного С-концевого домена. Поскольку во взаимодействии каталитического и структурного домена LOSK могут участвовать электростатические силы, изучили влияние на активность различных полиионов, взятых в концентрации 0,1 мг/мл. Гепарин, протамин сульфат и поли(L-Lys) ингибировали способность полноразмерной киназы фосфорилировать гистон Н1 в 10 раз. При этом гепарин не влиял на активность рекомбинантного фрагмента, а протамин сульфат и поли(L-Lys) влияли слабо. Протамин, кроме того, усиливал автофосфорилирование иммунопреципитированной протеинкиназы в 4 раза. Эти данные подтверждают, что структурный С-концевой домен LOSK участвует в регуляции ее протеинкиназной активности: протеинкиназа LOSK с отщепленным С-концевым доменом может становиться значительно менее зависимой от условий в клетке, чем полноразмерный фермент.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: