Связывание новых ингибиторов переноса электрона в фотосистеме 2 – производных перфторизопропилдинитробензола – с полипептидом Д2 реакционного центра

Аннотация

Исследовали место связывания новых ингибиторов типа К15 (производных перфторизопропилдинитробензола) с компонентами реакционного центра (РЦ) фотосистемы 2 (ФС-2) высших растений. Показано, что многократное отмывание субхлоропластных мембранных фрагментов, обогащенных ФС-2 (частиц BBY), обработанных ингибитором типа К15, включающее многократное разбавление в буфере (в присутствии высоких концентраций одно- и двухвалентных ионов), продолжительную (до 2–5 ч) инкубацию, центрифугирование и последующее ресуспендирование в буфере, не содержащем ингибитор, не приводит к восстановлению функциональной активности ФС-2. После добавления дитионита, вызывающего восстановление и разрушение ингибитора, и последующего удаления дитионита с помощью отмывания функциональная активность ФС-2 полностью восстанавливается. Инкубация в присутствии Ds-Na, приводящая к солюбилизации образца до уровня составляющих его полипептидных компонентов, вызывает появление фракции свободного, сохранившего исходную ингибирующую активность, соединения К15. С целью формирования ковалентной связи ингибитор–полипептид, сохраняющейся в условиях денатурирующего Ds-Na-ПААГ-электрофореза, был использован К15-N₃, азидсодержащий аналог ингибитора К15. Необходимость введения радиоактивной метки в молекулу ингибитора для его идентификации удалось обойти, выявив способность данного типа ингибиторов испускать характерную флуоресценцию, которая сохраняет свои свойства во всех применяемых экспериментальных условиях. С помощью техники фотоаффинного связывания и денатурирующего Ds-Na-ПААГ-электрофореза в присутствии 6 М мочевины на субхлоропластных мембранных фрагментах показано, что местом связывания ингибиторов типа К15 служит полипептид Д2, интегральный компонент реакционного центра ФС-2. Это согласуется с предложенным ранее механизмом ингибирующего действия соединения К15, согласно которому К15 вытесняет первичный акцептор электрона ФС-2, пластохинон Q_A, с его места связывания на Д2-белке. Следовательно, впервые найден агент, который избирательно связывается с полипептидом Д2 реакционного центра ФС-2. Полученные данные сопоставляются с существующей информацией о выявленных ранее участках ингибирующего действия и местах связывания известных ингибиторов переноса электрона ФС-2.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: