БИОХИМИЯ, 2003, том 68, вып. 1, с. 145–153
УДК 577.122.3
Активация гуанозин-5'-3-O-(тио)трифосфатом индуцирует дезагрегацию α-субъединицы Go-белка
National Laboratory of Biomacromolecules, Institute of Biophysics, Chinese Academy of Sciences
Поступила в редакцию 16.03.2002
После доработки 25.04.2002
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: Gоα, GTPγS, химическое поперечное сшивание, олигомеризация и дезагрегация, обмен GDP/GTP.
Аннотация
Миристилированную α-субъединицу G-белка (Gоα) экспрессировали в штамме JM109 клеток Escherichia coli, котрансформированном плазмидами pQE60 (Gоα) и pBB131 (N-миристоилтрансфераза, NMT). По данным гель-электрофореза в неденатурирующих условиях и гель-фильтрации, высокоочищенная Gоα в связанном с GDP состоянии может образовывать ди-, три-, тетра-, пента- и гексамерные олигомеры. Активация гуанозин-5′-3-O-(тио)трифосфатом (GTPγS) индуцирует дезагрегацию олигомерных форм Gоα до мономеров. При обработке Gоα сшивающим агентом N, N’-1,4-фенилендималеимидом (p-PDM) регистрировали образование множественных поперечно-сшитых продуктов, которое не происходило в случае предварительной обработки белка GTPγS. Иммуноблоттинг также выявил факт олигомеризации очищенной Gоα и ее дезагрегацию под действием GTPγS. Эти результаты являются прямым подтверждением теории «дезагрегации-сопряжения». Дезагрегирующий эффект GTPγS позволяет установить регуляторную роль обмена GDP на GTP в механизмах сигнальной трансдукции, сопряженных с G-белками.
Текст статьи
Сноски
* Адресат для корреспонденции и запросов оттисков.