Кинетический механизм взаимодействия митохондриальной NADH : Убихинон-оксидоредуктазы с нуклеотидами-субстратами трансгидрогеназной реакции

Аннотация

Исследовано влияние тинопалов (катионных бензоксалозолов) AMS-GX и 5BM-GX на NADH-оксидазную, NADH : феррицианид-редуктазную, NADH→APAD⁺-трансгидрогеназную реакции и на энергозависимое восстановление NAD⁺ сукцинатом, катализируемые NADH : убихинон-оксидоредуктазой (Комплексом I) в составе субмитохондриальных частиц (СМЧ). AMS-GX конкурирует с NADH в NADH-оксидазной и NADH : феррицианид-редуктазной реакциях (K_i = 1 мкМ). 5BM-GX ингибирует эти реакции по смешанному, по отношению к NADH, типу (K_i = 5 мкМ). Оба соединения не влияют на обратный перенос электронов от сукцината на NAD⁺. Характер влияния тинопалов на NADH→APAD⁺-трансгидрогеназную реакцию, протекающую с образованием тройного комплекса, свидетельствует об упорядоченном связывании нуклеотидов ферментом в ходе реакции: AMS-GX и 5BM-GX ингибируют эту реакцию бесконкурентно по отношению лишь к одному из субстратов (APAD⁺ и NADH соответственно). Конкуренция между 5BM-GX и APAD⁺ свидетельствует о том, что NADH является первым субстратом, связывающимся с ферментом. Для реакций прямого и обратного переноса электронов, катализируемых Комплексом I, показана различная специфичность к аналогам NADH и NAD⁺: при связывании восстановленного нуклеотида существенна никотинамидная часть молекулы. Результаты работы соответствуют модели, для которой в NADH→APAD⁺-трансгидрогеназной реакции, протекающей с образованием тройного комплекса, катализируемой ферментом, восстановленный нуклеотид связывается в центре, участвующем в NADH-оксидазной реакции, а окисленный нуклеотид – в центре, связывающем NAD⁺ при обратном переносе электронов.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи: