Анализ связывания биспецифических моноклональных антител с иммобилизованными антигенами с помощью оптического биосенсора

© 2002 Д.А. Дмитриев 1*, Ю.С. Массино 2, О.Л. Сегал 2, М.Б. Смирнова 2, Е.В. Павлова 3, Г.И. Коляскина 3, К.Г. Гуревич 1, О.В. Гнеденко 4, Ю.Д. Иванов 4, A.И. Арчаков 4, А.П. Осипов 1, А.Д. Дмитриев 2, А.М. Егоров 1

1 Кафедра химической энзимологии Химического факультета Московского государственного университета

2 Институт высшей нервной деятельности и нейрофизиологии РАН

3 Научный центр психического здоровья РАМН

4 Институт биомедицинской химии РАМН

Поступила в редакцию 03.09.2001
После доработки 19.11.2001

КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: биспецифические антитела, кинетические константы, бивалентное взаимодействие, взаимодействие антиген–антитело, биосенсор, IAsys, аффинность, авидность.

Аннотация

В настоящей работе с помощью оптического биосенсора IAsys изучалась кинетика связывания с иммобилизованными антигенами моноклональных антител (МКА) против пероксидазы хрена (HRP) и IgG человека (hIgG) и биспецифических моноклональных антител (БИАТ). БИАТ, полученные путем слияния родительских гибридом, несут два антигенсвязывающих сайта к различным антигенам и, таким образом, могут связываться с иммобилизованным антигеном только одним антигенсвязывающим сайтом (моновалентно). В данной работе с помощью биосенсора IAsys показано, что с иммобилизованной HRP родительские МКА связываются моновалентно и бивалентно, а с иммобилизованным hIgG1 родительские МКА связываются только моновалентно. Полученные с помощью IAsys наблюдаемые равновесные константы ассоциации (K_ass) хорошо согласовывались с константами, полученными с помощью радиоиммунологического метода в нашей предыдущей работе [1]. K_ass антипероксидазных МКА в 50 раз превышает K_ass сайта связывания с пероксидазой БИАТ. Кинетическая константа диссоциации антипероксидазных МКА в 21 раз меньше диссоциации БИАТ. Рассчитано, что около 95% всех связавшихся родительских антипероксидазных МКА ассоциированы с иммобилизованной HRP бивалентно и только около 5% моновалентно. Полученные данные позволяют утверждать, что БИАТ, несущие сайт связывания с ферментом, в гетерогенных неконкурентных иммунологических методах, не могут быть более эффективны, чем традиционные конъюгаты (т.е. антитела, конъюгированные с ферментом), если родительские МКА могут связываться бивалентно.

Текст статьи

Сноски

* Адресат для корреспонденции и запросов оттисков.