БИОХИМИЯ, 2002, том 67, вып. 11, с. 1561–1565
УДК 577.112.083
Доказательство существования промежуточного состояния при денатурации тироглобулина под действием гуанидингидрохлорида
1 Department of Biological Sciences and Biotechnology, Tsinghua University
2 Protein Science Laboratory of the Ministry of Education, School of Life Science and Engineering, Tsinghua University
3 Department of Chemistry, Guizh Institute for Nationalities
Поступила в редакцию 11.03.2002
После доработки 19.03.2002
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: тироглобулин, гуанидингидрохлорид, денатурация, интермедиат.
Аннотация
Денатурация бычьего тироглобулина в растворе гуанидингидрохлорида (GuHCl) изучена с использованием методов флуоресценции и КД. Положение максимума эмиссии флуоресценции (λmax) сдвигается в длинноволновую область с ростом концентрации GuHCl, причем зависимость λmax от концентрации GuHCl носит двухфазный характер. В интервалах концентраций GuHCl от 0 до 1,2 М и выше 1,6 М зависимости λmax от концентрации GuHCl являются S-образными. Область концентраций GuHCl от 1,2 до 1,6 М соответствует существованию интермедиата разворачивания. Этот интермедиат проявляет повышенную способность связывания флуоресцентного зонда – 1-анилино-8-нафталинсульфоната (ANS). Данные КД указывают на отсутствие заметных изменений вторичной структуры в области концентраций GuHCl от 1,2 до 1,6 М. По конформационным свойствам интермедиат сходен с состоянием расплавленной глобулы, возникающим при сворачивании полипептидных цепей. В области концентраций GuHCl выше 1,6 М наблюдаются дальнейшие изменения флуоресцентных свойств тироглобулина, сдвиг положения максимума эмиссии флуоресценции от 340 до 347 нм и существенное снижение связывания ANS. Эксперименты in vitro дают ключ к пониманию биохимического механизма агрегации и взаимодействия с молекулярными шаперонами при созревании тироглобулина in vivo.
Текст статьи
Сноски
* Адресат для корреспонденции и запросов оттисков.