Регуляторная α-субъединица киназы фосфорилазы может непосредственно участвовать в связывании гликогенфосфорилазы

1 Институт биохимии им. А.Н. Баха, Российская Академия Наук

2 Division of Molecular Biology and Biochemistry, School of Biological Sciences, University of Missouri

3 Department of Molecular, Cellular, and Developmental Biology, University of Colorado at Boulder

Поступила в редакцию 17.04.2002
После доработки 05.06.2002

КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: гликогенфосфорилаза b, киназа фосфорилазы, дрожжевая двухгибридная система, белок-белковое взаимодействие.

Аннотация

Для идентификации потенциальных участков взаимодействия самой крупной регуляторной α-субъединицы киназы фосфорилазы (КФ) с двумя фрагментами ее белкового субстрата, гликогенфосфорилазы b (Фb) был использован дрожжевой двухгибридный скрининг. Первый фрагмент, соответствующий остаткам 17–484 (ФbN′), содержал регуляторный домен белка, лишенный 16 N-концевых остатков, среди которых находится Ser14, подвергающийся фосфорилированию; второй фрагмент соответствовал остаткам 485–843 (ФbC) и содержал каталитический домен Фb. Была исследована возможность взаимодействия укороченных фрагментов α-субъединицы с этими двумя фрагментами субстрата. Для ФbC не было обнаружено взаимодействия ни с одним из фрагментов α-субъединицы; ФbN′, однако, взаимодействовала с фрагментом α-субъединицы (остатки 864–1014), находящимся вблизи участка фосфорилирования данной субъединицы. Взаимодействия ФbN′ с целой γ-субъединицей КФ и ее различными фрагментами обнаружено не было. Полученные результаты служат подтверждением идеи о том, что аминокислотные остатки вблизи фосфорилируемого серина Фb важны для ее специфического взаимодействия с каталитической субъединицей КФ, но вместе с тем и другие участки, помимо фосфорилируемого серина Фb и каталитического домена КФ, могут также быть вовлечены во взаимодействие этих двух белков.

Текст статьи

Сноски

* Адресат для корреспонденции и запросов оттисков.