БИОХИМИЯ, 2002, том 67, вып. 10, с. 1385–1393

УДК 577.152.1

Влияние взаимодействий между аминокислотными остатками 43 и 61 на термостабильность бактериальных формиатдегидрогеназ

Обзор

© 2002 В.В. Федорчук 1, А.Г. Галкин 1, И.Е. Ясный 1, Л.Б. Кулакова 1, А.М. Рожкова 1, А.А. Филиппова 2, В.И. Тишков 1*

1 Кафедра химической энзимологии химического факультета Московского государственного университета им. М.В. Ломоносова

2 Кафедра общей химии Московской медицинской академии им. И.М. Сеченова

Поступила в редакцию 26.04.2002

КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: формиатдегидрогеназа, термоинактивация, термостабильность, направленный мутагенез, Pseudomonas sp. 101, Mycobacterium vaccae N10.

Аннотация

NAD+-Зависимые формиатдегидрогеназы (КФ 1.2.1.2, ФДГ) из метилотрофных бактерий Pseudomonas sp. 101 (PseФДГ) и Mycobacterium vaccae N10 (MycФДГ) являются высокогомологичными ферментами. Они отличаются друг от друга всего двумя аминокислотами из 400 – Ile35 и Glu61 в MycФДГ вместо Thr35 и Lys61 в PseФДГ. Однако константа скорости термоинактивации MycФДГ при температурах 54–65° в 4–6 раз больше, чем соответствующая константа для фермента из Pseudomonas sp. 101. Для изучения роли этих остатков в стабильности ФДГ была изучена зависимость наблюдаемой константы скорости инактивации от концентрации фосфата и определены кинетические и термодинамические параметры процесса термоинактивации как рекомбинантных ферментов дикого типа, так и мутантных: MycФДГ Glu61Gln, Glu61Pro, Glu61Lys и PseФДГ Lys61Arg. Показано, что более низкая стабильность MycФДГ по сравнению с PseФДГ в основном обусловлена электростатическим отталкиванием между остатками Asp43 и Glu61. Замена остатка Lys61 на остаток Arg в молекуле PseФДГ не приводит к повышению стабильности этого фермента.

Текст статьи

Пожалуйста, введите код, чтобы получить PDF файл с полным текстом статьи:

captcha

Сноски

* Адресат для корреспонденции и запросов оттисков.